*一个,可以观察质壁分离
取洋葱紫色表皮细胞制成装片,载玻片一边滴糖水,观察质壁分离,然后加清水观察复原,说明有活性。
第二个,观察细胞质流动
取新鲜黑藻叶片制成装片,放在明亮的光下观察,看见叶绿体的运动,说明细胞质在流动,说明有活性。
第三个,细胞呼吸
取一个大锥形瓶里面放成熟植物的叶子和用小烧杯装的氢氧化钠溶液,密封,塞子上插上玻璃管里面封着一段水,放在黑暗处几小时,拿出来观察水的移动,如果水向着锥形瓶方向移动说明植物细胞吸收氧气放出二氧化碳,进行细胞呼吸,所以有活性。
测植物种子的SOD活性
肯定有影响,酶会失去活性。
可以试一下,冰水条件下,研磨。离心时间放长。
可以反应后加一下酒精试试。
植物组织中sod活性测定有何意义过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类,其活性高低与酚类物质代谢,植物抗性密切相关。从环境生物学来说,测定过氧化物酶活性能了解植物的进化阶段,以及进化趋势。更重要的是能确定之物在特定环境下的适应能力。刚才说过过氧化物酶与植物抗性密切相关,活性高当然抗逆性就越强,低就越弱,也就是对于逆境的忍受能力.这是我自己查资料帮你总结的哦!
如何验证植物细胞的活性用质壁分离法鉴定细胞死活是因为细胞膜失去了半透性。这样的话其实只要滴几滴染料或者墨水就可以鉴定细胞的死活了,因为染料和墨水分子是大分子物质,细胞膜有选择透过性,所以活细胞不会被染色,而死细胞的细胞膜失去半透性成为全透性膜,物质可以随意进出,就会被染上颜色。
植物组织中过氧化氢含量的测定实验40 植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定
植物在逆境下或衰老时,由于体内活性氧代谢加强而使H2O2发生累积。H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H2O2,是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此,植物组织中H2O2含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。
一、过氧化氢含量的测定
【原理】
H2O2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物—钛复合物黄色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波长下比色测定。在一定范围内,其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。
【仪器和用具】
研钵;移液管0.2ml×2支,5ml×1支;容量瓶10ml×7个,离心管5ml×8支;离心机;分光光度计。
【试剂】
100μmol/L H2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O2 57μl,溶于100ml,再稀释100倍;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸钛;丙酮;浓氨水
方法】
1.制作标准曲线:取10ml离心管7支,顺序编号,加入试剂。
待沉淀完全溶解后,将其小心转入10ml容量瓶中,并用蒸馏水少量多次冲洗离心管,将洗涤液合并后定容至10ml刻度,415nm波长下比色。
2.样品提取和测定:(1)称取新鲜植物组织2~5g(视H2O2含量多少而定),按材料与提取剂1∶1的比例加入4℃下预冷的丙酮和少许石英砂研磨成匀浆后,转入离心管3000 r/min下离心10min,弃去残渣,上清液即为样品提取液。(2)用移液管吸取样品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水,待沉淀形成后3000rpm/min离心10min,弃去上清液。沉淀用丙酮反复洗涤3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后,与标准曲线同样的方法定容并比色
植物组织中DNA用什么方法提取与测定?1. 称取2~5g 新鲜菠菜幼嫩组织或小麦黄花苗等植物材料,用自来水、蒸馏水先后冲洗叶面,用滤纸吸干水分备用。叶片称重后剪成1cm 长,置研钵中,经液氮冷冻后研磨成粉末。待液氮蒸发完后,加入15mL 预热(60~65℃)的CTAB 提取缓冲液,转入一磨口锥形瓶中,置于65℃水浴保温,0.5~1h,不时地轻轻摇动混匀。
2.加等体积的氯仿/异戊醇(24:1),盖上瓶塞,温和摇动,使成乳状液。
3.将锥形瓶中的液体倒入离心管中,在室温下4 000r/min 离心5min,静置,离心管中出现3 层,小心地吸取含有核酸的上层清液于量筒中,弃去中间层的细胞碎片和变性蛋白以及下层的氯仿。
4.根据需要,上清液可用氯仿/异戊醇反复提取多次。
5.收集上层清液,并将其倒入小烧杯。沿烧杯壁慢慢加入1~2 倍体积预冷的95%乙醇,边加边用细玻棒沿同一方向搅动,可看到纤维状的沉淀(主要为DNA)迅速缠绕在玻棒上。小心取下这些纤维状沉淀,加1~2 mL 70%乙醇冲洗沉淀,轻摇几分钟,除去乙醇,即为DNA 粗制品。
6.上述DNA 粗制品含有一定量的RNA 和其它杂质。若要制取较纯的DNA,可将粗制品溶于TE 缓冲液中,加入10mg/mL 的RNase 溶液,使其终浓度达50μg/mL,混合物于37℃水浴中保温30min 除去RNA。重复步骤2~5 的操作,可制得较纯的DNA 制品。
7.将DNA 制品溶于250μL 的TE 缓冲液中,完全溶解DNA 样品。
8.加入1/10 倍体积的3mol/L NaAc(pH6.8)和2 倍体积的95%乙醇,沉淀DNA,重复步骤5。很后,将DNA 溶于250μL 的TE 缓冲液中。
9.在751 型分光光度计上测定该溶液在260nm 紫外光波长下的光密度值。代入下式计算DNA 的含量。
结果计算
式中OD260nm 为260nm 处的光密度;L 为比色杯光径(cm);0.020 为1μg/mL DNA 钠盐的光密度。
DNA 的紫外吸收高峰为260nm,吸收低峰为230nm,而蛋白质的紫外吸收高峰为280nm。上述DNA 溶液适当稀释后,在751 分光光度计上测定其OD260nm、OD230nm 和OD280nm。如OD260nm/ OD230nm≥2OD260nm/ OD280nm≥1.8,表示RNA 已经除净,蛋白含量不超过0.3%。
附 注
如果植物样品不经液氮处理,提取液中的CTAB 浓度需要提高到4%(W/V)。在许多情况下,使用0.1%(V/V)巯基乙醇,并不能完全抑制叶片中的氧化作用,但是,这种氧化作用不会影响限制性内切酶的活性。如果使用的巯基乙醇浓度高于0.1%(V/V),则会大大降低DNA 的得率。
1.制备的DNA 在:(1)含有螯和剂如EDTA 中较稳定,因为EDTA 能螯和Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase;(2)在pH5~9 之间较稳定,否则过酸过碱会破坏DNA 的结构;
(3)有一定离子强度(强度越高, DNA 越稳定)的溶液中较稳定。
(TE 满足以上要求, 但如需对所得DNA 进行酶切, EDTA 浓度不可过高, 一般用0.1×TE 或0.2×TE)。
2.为了保证植物DNA 的完整性:(1)整个提取过程应在较低温度下进行(一般利用液氮或冰浴);这样可防止和抑制内源DNase 对DNA 的降解;(2)当DNA 处于溶解状态时,要尽量减弱溶液的涡旋,动作要轻柔;在进行DNA 溶液转移时用大口(或剪口)吸管,尽量减少对溶液中DNA 的机械剪切破坏
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